Fersht ve
ark. İndole-3-glycerol phosphate synthase(IGPS) ‘den yola çıkarak
phosphoribosylanthranylate isomerase(PRAI) elde etmişlerdir. Yönlendirilmiş
evrimin bu çarpıcı uygulaması aynı zamanda enzim evriminde ‘conserved scaffold’
hipotezinin de test edilmesini sağlamıştır.
Reetz ve ark. Pseudomonas aeruginosa’dan elde edilen bir lipazın 2-metildekanoata enantio
seçiciliğini yönlendirilmiş evrim tekniğini kullanarak artırmayı
başarmışlardır. Mutant kütüphanesinin taranmasında saf(R)- ya da (S)-p-nitrofenil ester kullanmışlardır.
Mutant enzimde aktif merkez dışındaki beş a.asidin yer değiştirdiği ve böylece
aktif merkez dışındaki loopların flexibilitesinin enantioseçiciliğe katkıda
bulunduğu anlaşılmıştır.
Bir enzimin
termal stabilitesindeki artışa aktivite kaybının eşlik edeceği yönündeki yaygın
kanıya rağmen, psycrophilic subtilisin proteazının termal stabilitesi 60 C ye
çıkarılmış ve 10 C deki aktivitesi de korunmuştur. Bu çalışmada psycrophilic ve
mesophilic enzimler arasındaki %30-80 lik amino asit farklılığına karşın mutant
enzimin sadece 7 amino asit değişimi içerdiği görülmüştür.(Miyazaki ve ark
2000) Maxygen(USA) ve
Novo Nordisk(Danimarka) araştırmacıları eşzamanlı olarak family-shuffled subtilisin
kütüphanesinde dört parametre taramış-
23 C de aktivite, termal stabilite, organik çözgen toleransı ve pH profili- herbir parametre için dikkate değer iyileşmeler gözlemlemişlerdir. Rasyonel protein
dizaynına ilişkin örnekler ise ;
-alfa amilazın
termal stabilitesini artırmak için asparagin artıklarının uzaklaştırılması,
rijid karaktere sahip prolin artığının eklenmesi ,
- Lizozimin termal
stabilitesini artrmak için disülfid köprülerinin eklenmesi,
-3-izopropil malat
dehidrogenazın termal stabilitesini artırmak için hidrofobik çekirdeğin güçlendirilmesi,
- Format
dehidrogenazın oksidasyon stabilitesini artırmak için Met ve Cys artıklarının
uzaklaştırılması ise olumlu sonuçlar vermiştir.
0 yorum:
Yorum Gönder